小鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

小鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒檢測操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

8.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。

9.  靈敏度:*檢測濃度小于1.0 ng/mL。

10.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

11.  重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

12.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

13.  有效期:6個月