有關(guān)細(xì)胞和組織學(xué)技術(shù)

免疫組織化學(xué)技術(shù)是用標(biāo)記物或顯色物標(biāo)記的抗體檢測細(xì)胞和組織內(nèi)的抗原，從而達(dá)到診斷和研究疾病的目的。抗原的準(zhǔn)確顯示和定位與制備的細(xì)胞和組織標(biāo)本質(zhì)量的好壞有著密切的。由于各種抗原的生化、物理性質(zhì)不同，如溫度高低、酸堿度強(qiáng)弱及各種化學(xué)試劑的作用均可影響抗原的免疫學(xué)活性，良好的細(xì)胞和組織學(xué)結(jié)構(gòu)將有助于抗原的準(zhǔn)確定位。因此，細(xì)胞和組織標(biāo)本的采集制備在免疫組織化學(xué)技術(shù)中占有十分重要的位置。

　　（一）細(xì)胞標(biāo)本的取材

　　目前，免疫組化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)診斷，如鑒別低分化癌與惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應(yīng)用于胸腹水中間皮瘤與癌的鑒別。McAb應(yīng)用于淋巴白血病和惡性淋巴瘤的分類分型。近年來，培養(yǎng)細(xì)胞的免疫組化技術(shù)在鑒定細(xì)胞的種類、分化程度、表面抗原特點(diǎn)以及腫瘤結(jié)構(gòu)成分改變等方面的研究均起到了積極作用。

　　細(xì)胞標(biāo)本的取材有以下3種方法:

　　．印片法　　主要應(yīng)用于活組織檢查標(biāo)本和手術(shù)切除標(biāo)本。新鮮標(biāo)本以zui大面積剖開，充分暴露病變區(qū)，將載玻片輕輕壓于病變區(qū)，脫落的細(xì)胞便粘附在玻片上，立即浸入細(xì)胞固定液內(nèi)5-0min，取出后自然干燥，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

　　優(yōu)點(diǎn)是簡便省時(shí)，細(xì)胞抗原保存較好。缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻，玻片上細(xì)胞重疊，影響標(biāo)記效果。

　　2．穿刺吸取涂片法　　主要應(yīng)用于實(shí)質(zhì)器官的病變區(qū)，如肝、腎、肺、淋巴結(jié)、軟組織等。用細(xì)針穿刺吸取病變區(qū)內(nèi)液體成分，如穿刺液較少，可直接涂抹在載玻片上，力求細(xì)胞分布均勻。如穿刺液較多，細(xì)胞豐富，可用洗滌法：將穿刺液滴入盛有-2ml Hanks液（RPMi 640液）的試管內(nèi)，輕輕攪拌，以500rpm低速離心5-0min后，棄上清液，將沉淀制成細(xì)胞懸液（濃度約2×06細(xì)胞/ml），吸取滴于載玻片上，輕輕涂抹，待涂片略干即可固定。

　　該法穿刺吸取直接涂片的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，細(xì)胞形態(tài)保持較好。缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻。洗涂法片雖可彌補(bǔ)這一缺點(diǎn)，但操作復(fù)雜，細(xì)胞常常發(fā)生變形。

　　3．體液沉淀涂片法　　主要用于胸水、腹水、尿液、腦脊液等體液多、細(xì)胞少的標(biāo)本。體液采取后，必須及時(shí)處理，更不宜加固定液。根據(jù)標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少選用不同的處理方法：①細(xì)胞數(shù)量極多者，可吸取少量液體直接涂在玻片上。②細(xì)胞數(shù)量較少者，可將液體自然沉淀，然后吸取5ml左右沉淀液，以500rpm離心0min，棄上清液，將沉淀涂片，略干后固定備用。

　　如用細(xì)胞離心涂片器（Cytospin ），可將標(biāo)本用上述離心沉淀法制成2×06細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液，吸取50μl加入涂片器內(nèi)，離心后即制成分布均勻的細(xì)胞涂片，細(xì)胞分布在直徑約6mm的小圓圈內(nèi)，每個(gè)圓圈內(nèi)的細(xì)胞數(shù)約05個(gè)（Danos,976）。

　　培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本的取材可根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞特性分別采取不同的方法。某些細(xì)胞有貼壁生長的特性，如纖維母細(xì)胞、粘液癌細(xì)胞等，只需將載玻片或蓋玻片插入培養(yǎng)液內(nèi)即可收集到理想的細(xì)胞標(biāo)本。某些細(xì)胞只能在培養(yǎng)液中生長，可用上述體液沉淀離心涂片法處理。

　　制備細(xì)胞涂片應(yīng)注意：①標(biāo)本反復(fù)離心洗滌，細(xì)胞的粘附性降低，在免疫組化染色過程中容易脫片，因此，在制備涂片前載玻片上應(yīng)涂粘附劑。②為節(jié)　省試劑和便于鏡下觀察和記數(shù)，應(yīng)將細(xì)胞集中到直徑0.6-.0cm的圓圈內(nèi)，細(xì)胞總數(shù)以05個(gè)為宜。③粘液豐富的標(biāo)本，如痰液，胃液等，未經(jīng)特殊處理，一般不宜作免疫組化標(biāo)記。

　　（二）組織標(biāo)本的取材

　　組織標(biāo)本主要取之于活組織檢查標(biāo)本、手術(shù)切除標(biāo)本、動物模型標(biāo)本以及尸體解剖標(biāo)本等。前三者均為新鮮組織，后者是機(jī)體死亡2h以上的組織，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有變性消失，嚴(yán)重彌散現(xiàn)象，因此，尸檢組織應(yīng)盡快固定處理，以免影響免疫組化標(biāo)記效果。但有些較穩(wěn)定性抗原，如HBsAg、HBcAg等在尸檢標(biāo)本中，抗原顯示仍較好。

　　組織標(biāo)本的取材常常受到各種因素的影響，如各種內(nèi)窺鏡鉗取的組織，常因過度擠壓而變形，嚴(yán)重者組織結(jié)構(gòu)被破壞。大組織標(biāo)本病變分布廣泛，抗原在組織中分布不均一，常出現(xiàn)人為的組織取材不準(zhǔn)確。為了避免上述缺點(diǎn)，組織取材時(shí)應(yīng)注意：①活檢鉗的刃口必須鋒利，以免組織受擠壓；②取材部位必須是主要病變區(qū)；③必須取病灶與正常組織交界區(qū)；④必要時(shí)取遠(yuǎn)距病灶區(qū)的正常組織作對照。

　　為充分保存組織的抗原性，標(biāo)本離體后慶立即作處理，或立即速凍成凍塊進(jìn)行冰凍切片，或立即用固定液固定進(jìn)行脫水、浸蠟、包埋、石蠟切片。如不能迅速制片，可貯存于液氮罐內(nèi)或-70。C冰箱內(nèi)備用。

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