如何zui大限度地降低組織非特異性染色？

（）縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是zui重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；

（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果；

（5）縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等；

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要；

（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。

蘇木素復(fù)染時(shí)間的把握？

（）蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即：染色深則分化時(shí)間稍長些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。

（2）鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（一定動作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭即可。抗體

（3）如果分化的顏色過淺，可以復(fù)置于蘇木素中染色。