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免疫測定中的干擾機制

更新時間:2015-11-20 點擊量:839

    HA 的產生機制至今還不能闡明,目前所使用的免 疫試劑抗體大多源于實驗動物,因此,體內含HA 的患者在做血清免疫檢測時,HA 可與試劑抗體結合而導致干擾。HA 通常與試劑抗體的Fc 區表位或者F(ab’)2 區域的決定簇結合。目前*的HA 在免疫測定中的干擾機制主要發生在夾心免疫測定法和競爭免疫測定法中。  

HA在夾心免疫測定法中的干擾機制

    ELISA夾心法測定中,HA與試劑抗體(捕獲抗體和標記抗體)的結合,可通過Fc-Fc 和Fab-Fab兩種結合方式干擾測定。正常情況下,在ELISA 夾心法中,待測抗原同時與捕獲抗體和標記抗體結合,形成了固相捕獲抗體-待測抗原-標記抗體的復合物。在以Fc-Fc 的方式結合的機制中,HA的Fc 端結合到捕獲抗體的Fc 段上,而HA的Fab 區域則結合到標記抗體的Fab 區域上,導致假陽性結果。在以Fab-Fab 結合方式的機制可引起假陽性或假陰性的結果,如HA的Fab區域通過分別結合捕獲抗體的Fab區域和標記抗體的Fab 區域,阻擋捕獲抗體和標記抗體與待測抗原的結合,從而導致假陰性;HA的F(ab’)2 通過同時結合捕獲抗體的Fab區域和標記抗體的Fab區域,形成固相捕獲抗體-HA-標記抗體復合物,如果標本中無待測抗原,HA就引起假陽性的結果。

HA在競爭免疫測定法中的干擾機制

    在免疫競爭法測定中,HA干擾也可造成假陽性或假陰性。在正常的競爭性免疫反應中,待測抗原與標記抗原競爭的結合到連接在載體上的捕獲抗體,形成正常的反應復合物。但是如果反應體系中存在HA,測定結果將可能出現假陽性或假陰性的現象。造成假陰性結果的機制:HA通過同時結合捕獲抗體和標記抗原,形成異常的反應復合物,干擾捕獲抗體結合檢測抗原,消耗可結合待測抗原的捕獲抗體,從而導致假陰性。造成假陽性結果的機制:HA直接結合捕獲抗體與抗原結合的部位,形成異常的復合物,占據捕獲抗體結合待測抗原或標記抗原的結合空間,消耗可結合待測抗原或標記抗原的捕獲抗體,導致假陽性。

3-位點免疫檢測法中的干擾機制

    該干擾存在于肌鈣蛋白I的免疫檢測中。所謂的3-位點是試劑盒中含有針對肌鈣蛋白I分子上3個不同抗原決定簇的3種抗體,肌鈣蛋白I可以同時結合2個捕獲抗體與個示蹤抗體或者個捕獲抗體與2個示蹤抗體,使特異性和靈敏度大大提高,后者可使反應的靈敏度進一步增高。由于肌鈣蛋白I 3-位點免疫測定增加了一種捕獲抗體或者標記抗體,這也同時提高了捕獲抗體或者標記抗體與HA結合的機率,從而導致肌鈣蛋白I 3-位點免疫測定比肌鈣蛋白I 雙位點免疫測定更加容易受到HA的干擾,結合的部位與上述兩種機制相似。


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