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PPA制備與使用的基本技術

更新時間:2015-12-14 點擊量:796

    將初步純化的SPA與HRP用過碘酸鈉氧化法(交聯反應時間在22℃下5h)交聯。

    將上述PPA溶液過Sephadex G-00柱,條件同前。所收集的第管至第22管的合并液,是PPA存在的主要組分,可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮,然后加入30%左右甘油,貯于4℃冰箱備用PPA的使用。ELISA試劑盒

    PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同,PPA代替了酶標抗抗體。在進行微量反應板測定時,PPA常常加入0.ml,稀釋度一般在:2至:00(應按不同情況試驗)。PPA與IgG是化學共價結合,反應時間不宜過長,不應超過2h,控制在30min-60min,反應時間過長會使PPA吸附到塑料載體上去。

    用PPA進行組織內有關抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響,因此組織不可用甲醛固定,可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內抗原(先與IgG結合)的定位,反應時間可以延長,便于滲透入組織細胞內,且沒發現嚴重的物理吸附現象。

    在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%(v/v)Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC緩沖液(2.42gTris溶于蒸餾水后用0.N HC調pH至7.4,然后加蒸餾水定容至000ml,zui后加0.5ml Tween 20)。ELISA試劑盒

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