、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
、根據(jù)樣品重量(g樣品加入3.5ml提取液,可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入),準(zhǔn)備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時(shí))。
3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或00rpm20min4℃
4、提取上清夜,樣品制備完成。
蛋白質(zhì)提取液:300ml
、Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種方法針對(duì)SDS-PAGE,垂直板電泳!
2、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
三氯醋酸—丙酮沉淀法
、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上小時(shí))棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上小時(shí)),然后真空干燥沉淀,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(5℃8000rpm以上小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),可臨時(shí)保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?/p>