植物Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗,往預(yù)先包被植物磷脂酸捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物磷脂酸呈正相關(guān),用酶標儀在450nm波長下測定吸光度,計算樣品濃度。
嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
使用植物Elisa試劑盒時要注意以下事項。
消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
在儲存和溫育時避免強光直接照射。
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡5-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線,好做復(fù)孔,如標本中待測物質(zhì)含量過高,樣本OD值大于標準品孔孔的OD值,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。