小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，用抗小鼠INS抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的小鼠INS會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入化的抗小鼠INS抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。

　　抗小鼠INS抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠INS結(jié)合、與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，INS濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中INS的濃度。

　　Elisa試劑盒實驗反應(yīng)時間注意事項：

　　、在備孔稀釋好待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品；

　　2、上板:應(yīng)從后一孔上完板開始計時，以確保反應(yīng)時間；

　　3、加底物：應(yīng)從加第一孔開始計時，以確保加終止液時的反應(yīng)時間是5分鐘。

　　小鼠ELISA試劑盒注意事項：

　　）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

　　2）實驗中不用的試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

　　2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

　　3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

　　4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

　　6）洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

　　7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

　　8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

　　9）按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。