elisa試劑盒中通常有兩種抗原抗體反應，即加入樣品和酶結合物后的反應。抗原抗體反應的完成需要一定的溫度和時間。這種保溫過程稱為孵化。有人稱之為孵育，這在elisa試劑盒中似乎不合適。

　　elisa屬于固相免疫分析，抗原和抗體的結合只發生在固相表面。以抗體包被的三明治法為例，添加到板孔中的抗原不具有固相抗結合的平等機會。只有靠近孔壁的一層溶液中的抗原與抗體直接接觸。這是一個逐漸平衡的過程，因此需要擴散才能達到反應的終點。隨后添加到固相抗原的酶標記抗體的結合也是如此。這就是為什么elisa反應總是需要一定的培養時間。

　　常用的培養溫度為43℃、37℃、室溫和4℃。37℃是實驗室常見的保溫溫度，也是大多數抗原和抗體結合的適宜溫度。建立酶聯免疫吸附法（elisa）研究反應動力學時，實驗表明，在37℃條件下，兩種抗原抗體反應在～2h后達到高峰。為了加速反應，可以提高反應溫度。有些試驗在43℃下進行，但不適合更高的溫度。4℃時抗原抗體反應更*。在放射免疫分析中，反應主要在冰箱中過夜，以形成更多的沉淀。但由于所需時間太長，一般不在elisa試劑盒中使用。

　　除一些帶有特殊電熱塊的elisa儀器外，一般采用水浴法。elisa試劑盒板可放置在水浴箱中，elisa板底部應靠近水面，以快速平衡溫度。為避免蒸發，應將板蓋上，或用塑料密封紙或保鮮膜覆蓋板孔。此時，反應板可以浮在水面上。如果使用培養箱，elisa試劑盒應放在濕盒中。濕箱應由傳熱良好的材料制成，如金屬。將濕紗布墊在盒底，然后將elisa板放在濕紗布上。濕箱應放在培養箱中預熱至規定溫度，尤其是在溫度較低時。無論是水浴培養還是濕箱培養，反應板都不應堆放，以確保每個板的溫度能夠快速平衡。對于室溫培養的反應，操作過程中的室溫應嚴格限制在規定范圍內。標準室溫為20~25℃，但在具體操作過程中可根據手冊要求進行控制。當在室溫下培養時，elisa試劑盒可以平放在控制臺上。應注意的是，孵化溫度和時間應盡可能準確。為了確保這一點，當一個人操作時，不應同時測量兩個以上的板。（內容僅供參考，如有問題或遇到問題，請在線咨詢，我們將竭誠為您服務）